国家卫生和计划生育委员会办公厅


关于印发《医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序》等技术规范的通知

　　
卫办医政函〔2013〕402号



各省、自治区、直辖市卫生厅局（卫生计生委），新疆生产建设兵团卫生局：

　　根据人感染H7N9禽流感疫情联防联控工作机制会议议定事项及《关于医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》（卫办医政函〔2013〕383号，以下简称《通知》）精神，为指导医院做好人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作，我委组织制定了《医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序》（附件1），并委托中国疾控中心制定了《人感染H7N9禽流感病毒核酸检测实验室生物安全保障基本要求》（附件2）等技术规范。现转发给你们（可从国家卫生和计划生育委员会网站医政管理栏目中下载），供医院在开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测时参考使用。

　　各省级卫生（卫生计生）行政部门要按照《通知》有关要求，组建省级疾控机构实验室和省级临床检验专家共同组成的专家组，对医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作提供技术指导和支持，负责医院实验室核酸检测质量控制工作。要组织本辖区人感染H7N9禽流感病毒核酸检测定点医院检验人员进行培训，认真学习掌握相关要求，提高检验人员技术能力和水平。医院开展病毒核酸检测时，应当按照技术规范有关要求，规范开展检测工作，重视实验室质量控制，保障实验室生物安全，做好检验人员职业防护，保证检测结果科学、可靠。



附件：1.医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序.docx

2.H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书.docx



国家卫生和计划生育委员会办公厅

2013年5月16日





医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序


　　　　 
　　　　一、目的
　　　　确保人感染H7N9禽流感病毒核酸检测过程标准化、规范化，降低人为不规范操作对检测结果造成的影响，保证结果的准确性和可重复性。
　　　　二、适用范围
　　　　医疗机构临床基因扩增检验实验室按照《关于医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》（卫办医政函〔2013〕383号）和《关于做好医疗机构人感染H7N9禽流感检测试剂供给保障工作的通知》（卫发明电〔2013〕29号）有关要求，使用国家疾病预防控制中心制备或商品化试剂盒开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作。
　　　　三、样本采集、运送和保存
　　　　尽量采集病例发病早期的呼吸道样本(上呼吸道样本包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液, 下呼吸道样本包括痰液、气管吸取物、肺洗液、肺组织等)。可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高检出率。患者有下呼吸道样本时，应优先采集。
　　　　根据试剂说明书对样本采集方法有关要求，制订样本采集标准操作程序（SOP），并组织样本采集人员进行培训及考核。样本的采集应当严格按照SOP进行。
　　　　样本采集后，按照《人间传染病的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒的相关规定进行包装，用密封容器立即送往实验室。若气温高时，需放入冰块降温。样本抵达实验室后，应尽快进行检测，24小时内能检测的样本可置于2～8℃暂时保存，24小时内无法检测的样本则应置于≤-70℃状态保存。如无-70℃保存条件时，可于-20℃冰箱暂存。样本避免反复冻融。
　　　　样本采集、处理、运输及保存不当时，可因病毒RNA降解出现假阴性结果，也可因为样本“污染”出现假阳性结果。
　　　　四、PCR检测
　　　　（一）样本处理
　　　　样本的核酸提取应当在样本处理区进行。按所采用的商品化试剂盒说明书要求，取适量待检样本、阳性及阴性对照进行核酸提取。样本应尽可能新鲜，提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA降解。提取过程如涉及离心步骤，应采用低温冷冻离心机；在生物安全柜内进行加样、提取过程中，为防止RNA降解，可将试管架置于托盘内平铺的碎冰上。提取好的RNA应及时用于检测，否则应当-70℃保存。如无-70℃保存条件，可于-20℃冰箱暂存。
　　　　（二）试剂准备
　　　　试剂准备应当在试剂准备区进行。根据所用的试剂盒，样本可进行甲型流感病毒核酸、禽流感H7亚型或H7N9病毒核酸的检测。试剂的配制按所用商品化试剂盒说明书进行。除酶混合物外，其它试剂在使用前应当在室温充分复融，混匀并瞬时低速离心。反应液分装时尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免管内溶液泄露污染仪器。分装有扩增反应液的反应管应当扣盖或装入密实袋内再转移至样本处理区。
　　　　（三）加样
　　　　加样应当在样本处理区进行。加样时应当使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。
　　　　按试剂、仪器说明书完成加样和PCR反应管准备。
　　　　（四）PCR扩增检测
　　　　PCR扩增检测在扩增区进行。待检PCR管转移至扩增区，按顺序置于PCR仪上，编辑样本信息，按试剂和仪器说明书设定循环参数。
　　　　（五）结果分析
　　　　根据所用试剂盒说明书设置基线值（baseline）。荧光阈值（threshold）设定以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线（无规则的噪音线）的最高点为原则，且Ct值应大于所设置的扩增循环数（或显示为undet）。使用仪器配套软件自动分析结果。
　　　　（六）质量控制
　　　　检测过程对可能出现的假阳性和假阴性进行质量控制，除了检测商品试剂盒所提供阳性和阴性对照外，每次临床样本检测时，至少应当有1份弱阳性和3份阴性质控样本（多份阴性质控样本设置对实验室“污染”所致假阳性的监控更为有效），随机放在所检测标本的中间。弱阳性质控样本可为检测阳性的灭活稀释后保存的临床样本、灭活病毒或假病毒颗粒等，如所采用的商品化试剂盒有“内标”控制假阴性，或弱阳性质控样本来源困难，可暂不设弱阳性质控。阴性质控样本采用标本采集管内溶液即可。质控样本应与临床标本同等对待，参与样本核酸提取和扩增检测全过程。
　　　　试剂盒中的阳性和阴性对照用于判断实验室的有效性，按试剂盒说明书进行。
　　　　（七）实验结果的判定与解释。
　　　　按照试剂盒说明书进行。对于出现弱阳性结果的样本应进行重复检测，并注意与可能的实验室轻度或样本交叉“污染”所致假阳性结果区别。
　　　　五、检测结果报告
　　　　按照试剂盒说明书进行。
　　　　六、其它注意事项
　　　　（一）人感染H7N9禽流感病毒实验室活动、样本采集和运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。从事人感染禽流感检测的技术人员必须经过生物安全培训并具备相应的实验技能，在检测过程中必须采取生物安全防护措施（使用眼罩、N95型口罩等）。样本核酸提取必须在Ⅱ级生物安全实验室，经过年检合格的二级生物安全柜内进行。实验室应具有良好的通风。
　　　　（二）注意仪器设备的日常和定期维护，加样器、扩增仪和温育设备应进行定期校准。试剂盒及一次性使用的无DNA酶和RNA酶PCR反应管、离心管、带滤芯吸头等应进行每批质检。
　　　　（三）实验应严格分区操作；各区物品、工作服等均应当专区专用，不得交叉使用。实验后应及时清洁工作台，以防污染。
　　　　（四）每批实验室后，可采取实验室通风、10%次氯酸钠溶液擦洗地台面、紫外照射等措施，消除可能存在的扩增产物气溶胶污染。
　　　　（五）使用中国疾控中心制备试剂开展检测工作时，可参考相应试剂盒说明书（见附件1、2）有关要求。
　　　　 
附件：1.H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）说明书
2.H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）说明书
 
　　　　【产品名称】
　　　　通用名称：H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）
　　　　英文名称：Diagnostic Kit for H7N9 subtype avian flu virus RNA（Fluorescence PCR）
　　　　【包装规格】48人份/盒。
　　　　【预期用途】
　　　　本试剂用于对咽拭子样本中H7N9亚型禽流感病毒RNA进行定性检测，用于H7N9禽流感病毒感染的辅助诊断及流行病学监控。
　　　　【检验原理】根据荧光PCR技术原理，针对H7N9亚型禽流感病毒的HA基因和NA基因设计特异性引物和Taqman探针，通过荧光PCR检测仪进行检测，从而实现对H7N9亚型禽流感病毒RNA的定性检测。试剂盒以正常人上皮细胞中广泛存在的核糖核酸酶P（RNase P）的mRNA为正常人体细胞对照，对提取和检测过程进行监控。
　　　　【主要组成成分】
　　　　 
　　　 
名称 成分 　　规格 数量(管)
H7反应液 　　含内标RNP 、H7亚型特异基因的引物探针混合液 1.0ml/管 1
N9反应液 　　含内标RNP 、N9亚型特异基因的引物探针混合液 1.0ml/管 1
DNA聚合酶 　　DNA聚合酶，不可用其他同类DNA聚合酶替代 60μl /管 1
逆转录酶 　　逆转录酶，不可用其他同类逆转录酶替代 60μl /管 1
阳性对照 　　RNP、H7、N9 RNA假病毒混合物 1.0ml/管 1
阴性对照 　　DEPC水 1.0ml/管 1
　　本品各组成成分均不得与其他产品或不同批号产品中的相应组成成分进行互换。
　　 
　　　　本品不包含，但对试验必须的设备和试剂：
　　　　生物安全柜、台式离心机、旋涡震荡器、拭子、采样管、无菌病毒采样液、1.5 ml无核酸酶的离心管、全自动荧光PCR检测仪专用PCR扩增管和核酸分离试剂盒(硅胶膜吸附法，北京金豪制药股份有限公司，Cat：BJH101)。
　　　　【储存条件及有效期】-20℃冷冻保存，有效期2个月，阳性对照反复冻融次数不得超过5次。
　　　　【适用仪器】RG3000、LightCycler、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自动荧光PCR检测仪。
　　　　【样本要求】
　　　　1. 样本类型：咽拭子。推荐使用金豪公司生产的微生物采样及运送管（12人份/盒）。
　　　　2. 拭子、采样管和保存液：
　　　　2.1拭子选择：应使用头部为合成纤维（例如，聚酯纤维），杆部为铝或塑料的拭子。
　　　　2.2采样管：外螺旋口、耐-70℃冻存，可容纳3 ml病毒采样液。
　　　　2.3无菌病毒采样液：应含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生产的抗生素，缓冲液，经无菌处理。
　　　　3.样本采集、运输和保存：
　　　　由于H7N9亚型禽流感病毒为呼吸道传播病毒，有关生物安全应按照“《人间传染的病原微生物名录》”中高致病性禽流感病毒进行管理。
　　　　3.1采集：采集病人发病3日内的咽拭子标本，用于病原检测。用微生物采样及运送管内的采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉签放入装有3ml保存液的15ml外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥，外表贴上带有唯一识别号码的标签。4℃暂存并在48小时内送达实验室。
　　　　3.2保存和运输：新鲜采集样本应在4℃条件下48小时运送到检测实验室。保存样本可在-20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于-70℃冰箱。冷冻样本应在冷冻条件下送至实验室。运输时在包装箱内填充吸水材料，运输过程中保持标本采集管直立状态，不能倾斜。
　　　　样本送至实验室后，立即进行处理和分装，避免反复冻融。临床样本保存在4℃不能超过4天。
　　　　4.咽拭子标本的处理
　　　　咽拭子要在标本保存液中充分搅动（至少 40 下），以洗脱拭子上粘附的病毒及含有病毒的细胞等，用于病毒分离时，需要冻融一次（防止多次冻融），使细胞破裂，释放病毒颗粒。然后在4℃条件下，10000rpm离心20分钟，用上清接种细胞或直接提取RNA。如果发现有细菌污染，须用滤器过滤除菌。
　　　　【检验方法】
　　　　1. 核酸提取：
　　　　取200μl咽拭子样本进行核酸提取。采用北京金豪制药股份有限公司的核酸分离试剂盒 (硅胶膜吸附法)，该试剂盒可用于对呼吸道悬浮液样本中的病毒RNA提取，并按试剂盒说明书要求操作。
　　　　本品的阳性对照和阴性对照均参与核酸提取。
　　　　1.1. 准备及注意事项：
　　　　1.1.1 分别在洗液A瓶和洗液B瓶中加入16ml和60ml无水乙醇，颠倒充分混匀，并在瓶身上加以标识。
　　　　1.1.2  吸取所需的洗脱液，加至一无核酸酶的eppendorf管中，于70℃预热。
　　　　1.1.3  冷冻样本应室温融化，轻微震荡混匀后使用。
　　　　1.1.4  区分操作中的离心设置（rpm和g），本产品操作过程均为室温离心。
　　　　1.1.5  助沉剂在低温保存时可能呈胶状，吹打混匀即可使用。
　　　　1.2. 样本裂解及核酸吸附
　　　　1.2.1  在1.5ml无核酸酶的离心管中加入10μl助沉剂和400μl裂解液，加入200μl待处理样本，剧烈震荡2分钟，室温静置10分钟。
　　　　注：如样本体积小于或大于200μl，需按比例改变助沉剂、裂解液以及无水乙醇体积。体积大于400μl样本应分多次进行处理。
　　　　1.2.2  加入480μl无水乙醇，颠倒混匀，吸取600μl裂解混合物转移到核酸吸附柱中。
　　　　注：如样本体积小于或大于200μl，需按比例改变乙醇用量。
　　　　1.2.3  3500g离心2分钟，取下套管，倒掉套管中的液体。将剩余裂解混合物转移至核酸吸附柱，重新离心一次，弃套管中的液体。
　　　　1.2.4  将核酸吸附柱重新装入套管，6000g离心1分钟，倒掉套管中的液体。
　　　　1.3. 核酸纯化
　　　　1.3.1  将核酸吸附柱重新装入套管，在核酸吸附柱中加入500μl洗液A，6000g离心1分钟，将核酸吸附柱装入一个干净套管中。
　　　　1.3.2  在核酸吸附柱中加入500μl洗液B，静置1分钟，6000g离心1分钟。
　　　　1.3.3  倒掉套管中的液体，将核酸吸附柱重新装入套管。
　　　　1.3.4  重复一次1.3.2步骤(本步骤不用静置1分钟)。
　　　　1.3.5  将核酸吸附柱换一新套管，13000rpm离心3分钟。
　　　　1.4. 核酸洗脱
　　　　1.4.1  将核酸吸附柱装入一无核酸酶1.5ml离心管，小心在吸附膜中央加入50μl预热洗脱液，室温静置4分钟。
　　　　1.4.2  10000 rpm离心2分钟，离心管中液体即待测样本RNA。
　　　　2. PCR扩增：
　　　　2.1 实验设计：
　　　　2.1.1待检样本检测：每份样本分别使用2种反应液（H7和N9反应液）进行检测，综合2种反应液的检测结果对样本进行判定。
　　　　2.1.2对照品检测：每次试验都应设置阴性对照和阳性对照。
　　　　2.2反应体系的配制：
　　　　2.2.1准备工作：将2种反应液（H7和N9反应液）融化后振荡混匀，离心6000rpm 10秒。
　　　　2.2.2 2种反应体系（H7和N9）的配制：取2个1.5ml 无核酸酶离心管，计算待测样本数量(n)，分别取20μl×（n+2）反应液（H7和N9）、0.5μl×（n+2）DNA聚合酶和0.5μl×（n+2）逆转录酶充分混匀，离心6000rpm 10秒。
　　　　n + 2 = n份样本+1份阳性对照+1份阴性对照；
　　　　2.3反应体系分管：
　　　　每份待测样本设置2个PCR扩增管（H7和N9），分别将每种反应体系按20μl/管分装至对应的PCR扩增管中。
　　　　2.4加样：
　　　　每份待测样本RNA、阳性对照、阴性对照以5μl/管分别加入2个PCR扩增管中。
　　　　2.5扩增检测：
　　　　将加样后的PCR扩增管分别转移到全自动荧光定量PCR检测仪上进行扩增检测，不同仪器的设置如下：
　　　　2.5.1全自动荧光定量PCR检测仪（RG3000、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型）扩增程序：
　　　　对于ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自动荧光定量PCR检测仪，荧光信号设置为：Reporter Dye1：FAM、JOE/VIC，Quencher Dye1：NONE，Passive Reference：NONE。其他型号仪器可设置为FAM和HEX通道。荧光PCR扩增程序的设置见表1。反应总体积为25μl。
表1.荧光PCR扩增程序
　　步骤 　反应温度 　　时间 是否采集光 循环数
　　逆转录及变性 　50℃ 　30分钟 　　否 　　1
　95℃ 　3分钟 　　否
　　预扩增 　95℃ 　15秒 　　否 　　5
　50℃ 　30秒 　　否
　72℃ 　1分钟 　　否
　扩增及荧光收集 　95℃ 　10秒 　　否 　　40
　55℃ 　40秒 　　是
　　　　2.5.2 全自动荧光定量PCR仪（Roche LightCycler系列）扩增程序：
　　　　选择FAM、HEX通道收集荧光。荧光PCR扩增程序见表2。
表2.荧光PCR扩增程序
　　步骤 反应温度 　　时间 是否采集荧光 循环数
逆转录及变性 50℃ 　　30分钟 　　否 　　1
93℃ 　　3分钟 　　否
　　预扩增 93℃ 　　15秒 　　否 　　5
50℃ 　　30秒 　　否
72℃ 　　1分钟 　　否
扩增及荧光收集 93℃ 　　10秒 　　否 　　40
55℃ 　　40秒 　　是
　　 
　　　　3. 结果分析：
　　　　3.1本品H7荧光探针的报告荧光为FAM，N9荧光探针的报告荧光为FAM，RNP荧光探针的报告荧光为HEX。所以应选择FAM通道和HEX通道分析试验结果。
　　　　3.2 基线（Baseline）范围根据仪器要求设定，目的为校正背景荧光干扰，终止循环（End）一般设置为最强样本出现扩增信号的前3-4个循环。
　　　　3.3 阈值线用于判断样本是否扩增，应调整使阈值线高于荧光背景和阴性对照的荧光信号，或点击分析（Analysis）自动获得。
　　　　4. 质量控制：
　　　　每次试验应设置阳性对照和阴性对照，且应符合以下要求，否则试验结果不成立。
　　　　4.1阴性对照无Ct值或Ct值为0。
　　　　4.2 阳性对照Ct值小于30.0。
　　　　【参考值（参考范围）】
　　　　Ct值≤37.0报告该反应阳性；
　　　　无Ct值或Ct值为0报告该反应阴性；
　　　　37.0＜Ct值＜40.0为灰区；
　　　　内标RNP有效的范围为：0＜Ct值＜33.0；
　　　　【检验结果的解释】
　　　　1. 在内标RNP结果成立的条件下各种判读模式如下：
反应液 模式1 模式2 模式3 模式4
H7 - - + +
N9 - + - +
RNP + + + +
结果判断 H7N9亚型禽流感病毒RNA阴性 H7N9亚型禽流感病毒RNA阴性 H7N9亚型禽流感病毒RNA阴性 H7N9亚型禽流感病毒RNA阳性
　　注：在内标RNP结果不成立的条件下视为检测异常，应重新采样检测。
　　　　2. 结果在灰区的样本需重复试验：取200μl样本重新提取RNA（核酸分离试剂盒中裂解液、无水乙醇的用量加倍，其他组分的用量不变）并检测。复检结果Ct＜40.0的样本为阳性，否则为阴性。
　　　　3. 内标RNP检测靶物质为正常人上皮细胞中广泛存在的核糖核酸酶P（RNase P）的mRNA，用于对样本中RNA的提取和扩增检测过程进行有效监控。
　　　　如果该份样本的RNP检测 Ct值≥33.0，可能为以下原因：
　　　　3.1 未采集到足够的正常人上皮细胞，应重新采样。
　　　　3.2核酸提取过程异常，导致RNA损失，应重新提取。
　　　　3.3样本中存在RT-PCR抑制物质，可稀释后检测；
　　　　【检验方法的局限性】
　　　　1.样本中RNA浓度低于本产品的最低检出值（100copies/ml）时可能出现假阴性。
　　　　2.目前研究显示，发病后两日内取样检测，病毒RNA检出率最高，随发病时间的延长，病毒被清除，病毒核酸的检出水平迅速下降。因此应在发病后尽早采样，必要时可采用多部位取样检测。临床评价应结合其他临床症状和实验室检测指标进行判断。
　　　　【产品性能指标】
　　　　1.本品可最低检出100copies/ml稀释物。
　　　　2.本品对季节性流感（H1N1以及H3N2）灭活病毒、B型流感灭活病毒、高致病性禽流感灭活病毒（H5N1）RNA进行检测，结果为阴性。
　　　　【注意事项】
　　　　1.开始检测前请仔细阅读本说明书全文，并严格按照要求进行操作。
　　　　2.实验室配置和试验操作请按照《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》和《临床基因扩增检验实验室工作规范》进行；整个检测过程应严格分区进行：PCR反应体系的配置区；标本处理、加样区；各区使用的仪器、设备、耗材和工作服应独立专用。
　　　　3.H7N9亚型禽流感为经呼吸道传播疾病，应按照相关要求进行。样本的采集、处理、运输和保存均存在一定生物危害。样本的采集、运输和保存应按照乙类传染病进行管理；标本的提取必须在生物安全二级实验室的负压生物安全柜中完成；试验中接触过标准品和对照品的废弃物品（如吸头）、扩增完毕的离心管、标本等应进行无害化处理后方可丢弃。
　　　　4.不同批号的试剂请勿混用，请在有效期内使用试剂盒。
　　　　5. 本产品仅用于体外诊断检测。
　　　　【参考文献】
　　　　1. 微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 233-2002）
　　　　2.《人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第2版）》
　　　　3.《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）
　　　　【生产企业】
　　　　企业名称：北京金豪制药股份有限公司
　　　　生产地址：北京市北京经济技术开发区运成街7号
　　　　注册地址：北京市北京经济技术开发区运成街7号1号楼
　　　　邮政编码：100176
　　　　电话号码：010-67878866
　　　　传真号码：010-67881632
　　　　网    址：www.kinghawk828.com
　　　　【医疗器械生产企业许可证编号】京药监械生产许20050017号
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　

H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒
（PCR-荧光探针法）说明书
　　　　 
　　　　【产品名称】通用名称：H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
　　　　英文名称：Detection Kit for Avian Influenza Virus Subtype H7N9 RNA (PCR-Fluorescence Probing)  
　　　　【包装规格】大包装，48反应/盒
　　　　【预期用途】
　　　　流感病毒可分为甲（Ａ）、乙（Ｂ）、丙（Ｃ）三型。其中，甲型流感依据流感病毒血凝素蛋白（HA）的不同可分为1-16种亚型，根据病毒神经氨酸酶蛋白（NA）的不同可分为1-9种亚型，HA不同亚型可以与NA的不同亚型相互组合形成不同的流感病毒。而禽类特别是水禽是所有这些流感病毒的自然宿主，H7N9禽流感病毒是其中的一种。H7N9流感病毒既可以感染禽类，也可以感染人。人感染H7N9禽流感会出现严重肺炎，症状包括发烧、咳嗽、呼吸困难等。
　　　　本试剂盒适用于检测呼吸道样本、血清、肺组织等样本中H7N9禽流感病毒RNA，可用于该病毒感染的实验室诊断和宿主动物的监控。检测结果仅供研究，不用于临床诊断。
　　　　【检验原理】
　　　　本试剂盒基于实时荧光PCR技术，分别选取H7N9禽流感病毒的HA基因和NA基因保守区作为扩增靶区域，设计特异性引物探针，通过一步法实时荧光PCR体系扩增对H7N9禽流感病毒进行定性检测。反应体系中除特异性引物和特异性荧光探针外，还配以对应的PCR反应Buffer、逆转录酶、Hot-Start Taq酶、核苷酸单体（dNTPs）、Mg2+等成分，可实现对H7N9禽流感病毒核酸灵敏特异地检测。
　　　　【主要组成成分】
组分名称 规格 数量
PCR检测试剂 AIV H7 PCR反应液A 816µl/管 1
AIV N9 PCR反应液A 816µl/管 1
AIV H7N9 PCR反应液B 288µl/管 1
AIV H7N9内标溶液 240µl/管 1
质控品 阴性质控品  200µl/管 1
AIV H7N9阳性质控品 200µl/管 1
 
　　　　【储存条件及有效期】保存于-20±5℃，反复冻融次数＜5次，有效期9个月。
　　　　【适用仪器】ABI 7500、ABI 7300、LightCycler480等荧光定量PCR仪。
　　　　【样本要求】
　　　　1 适用样本类型：呼吸道样本、血清、肺组织。
　　　　2 样品采集、保存与运送。
　　　　标本采集、保存、运送请遵循《人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略》。
　　　　【检验方法】
　　　　1.核酸提取
　　　　建议取200µl液态样本进行核酸提取；组织样本可以研磨液进行提取操作。可采用中山大学达安基因股份有限公司生产的核酸提取试剂盒，请按照试剂盒说明书进行操作；也可选择其他合适的商业化产品。本试剂盒中的内标溶液参与提取过程，若提取试剂盒中未说明内标的使用方法可在每200µl样本中加入4µl内标溶液后进行核酸提取。
　　　　本试剂盒中的阴性质控品参与提取，用于对环境进行监控；AIV H7N9阳性质控品不参与提取，用于PCR检测试剂的质控。
　　　　2.PCR扩增（ABI 7500仪器操作为例，ABI 7300、LC480等仪器参照此操作及仪器操作手册）
　　　　2.1分别配制AIV H7 RT-PCR反应体系和AIV N9 RT-PCR反应体系
　　　　2.1.1 AIV H7 RT-PCR反应体系配制
　　　　取适量PCR反应管（按AIV H7反应体系计算）；每管加入AIV H7 PCR反应液A 17µl、AIV H7N9 PCR反应液B 3µl（也可按照单个反应的用量，计算PCR反应液A、B各自所需总量，两者混匀后分装20µl于单个PCR反应管中）。
　　　　2.1.2 AIV N9 RT-PCR反应体系配制
　　　　取适量PCR反应管（按AIV N9反应体系计算）；每管加入AIV N9 PCR反应液A 17µl、AIV H7N9 PCR反应液B 3µl（也可按照单个反应的用量，计算PCR反应液A、B各自所需总量，两者混匀后分装20µl于单个PCR反应管中）。
　　　　2.2 于上述PCR反应管中分别加入处理后的阴性质控品、AIV H7N9阳性质控品、待测标本核酸各5µl，8,000rpm离心数秒，放入PCR扩增仪。
　　　　2.3探针检测模式设置为：Reporter Dye1：FAM，Quencher Dye：NONE，Reporter Dye2：Vic，Quencher Dye2：NONE， Passive Reference：NONE。反应条件设置为：50℃ 15min，1个循环；95℃ 15分钟，1个循环；94℃ 15秒→58℃ 45秒（收集荧光），45个循环。保存文件，运行。
　　　　3.结果分析
　　　　3.1 反应结束后保存检测数据文件。
　　　　3.2 分析条件设置：根据分析后图像调节Baseline的start值、stop值以及Threshold的Value值（用户可根据实际情况自行调整，Start值可以在3～15、End值可设在5～20，调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击Analysis自动获得分析结果，在Report界面察看结果。
　　　　【质量控制】
　　　　阴性质控品：FAM检测通路扩增曲线无对数增长期，VIC检测通路扩增曲线为明显对数增长期；
　　　　阳性质控品：FAM检测通路扩增曲线有明显对数增长期，且FAM检测通道扩增曲线 Ct值≤32；
　　　　以上要求需在同一次实验中同时满足，否则，本次实验无效，需重新进行。
　　　　【结果判定】
　　　　1.如果检测样品的AIV H7及N9 RT-PCR反应体系FAM检测通道均无扩增曲线或Ct值＞40，且在VIC检测通道均有对数增长期，可判样品为H7N9禽流感病毒阴性；
　　　　2.如果检测样品的AIV H7及N9 RT-PCR反应体系扩增曲线在FAM,VIC检测通道均有对数增长期且FAM检测通道Ct值≤40；可判样品为H7N9禽流感病毒阳性；
　　　　3.如果检测样品的AIV H7或N9 RT-PCR反应体系仅其中之一的扩增曲线满足判为阳性的要求，则需重复检测；若重复检测结果为H7及N9均阳性，则判H7N9禽流感病毒阳性；若重复检测结果仍为H7（或N9）阳性，则只能判禽流感病毒H7（或N9）亚型阳性，并建议以其他方法做进一步确认。
　　　　【检测方法的局限性】
　　　　1.样本检测结果与样本收集、处理、运送及保存质量有关。
　　　　2.样本处理时没有控制好交叉污染，可能出现假阳性结果。
　　　　3.病毒在流行过程中的基因突变则也可能导致假阴性结果。
　　　　4.由于不同提取方法的原理不同，采用不同核酸提取试剂进行样本处理时核酸提取效率存在一定差异，本试剂盒推荐使用本公司生产的核酸提取试剂盒（离心柱法），用户可根据具体要求进行选择确认。
　　　　5.本检测结果仅供临床参考，如需确诊病例请结合临床症状及其他检测手段.
　　　　【产品性能指标】
　　　　根据产品分析性能评估结果，本试剂盒的分析灵敏度为1.0×103copies/ml。与感染部位相同或感染症状相似的其他病原体（甲型流感病毒H3亚型、甲型流感病毒H1亚型、乙型流感病毒、副流感病毒、禽流感H5亚型病毒、禽流感H9亚型病毒等）无交叉反应。
　　　　【注意事项】
　　　　1.实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，实验人员必须进行专业培训，实验过程严格分区进行（试剂准备区、标本制备区、扩增和产物分析区），所用消耗品应灭菌后一次性使用，实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区各阶段用品不能交叉使用；
　　　　2.为试剂和标本准备阶段提供生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，使用自卸管移液器；
　　　　3.试剂使用前要完全解冻，8,000rpm离心数秒后使用；
　　　　4.标本制备区所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢弃；
　　　　5.实验完毕用10%次氯酸或75%酒精或紫外线灯处理工作台和移液器；
　　　　6.本试剂盒内阳性质控品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。
　　　　【生产企业】企业名称：中山大学达安基因股份有限公司
　　　　生产地址：广州市高新技术产业开发区香山路19号；广州市高新技术产业开发区荔枝山路6号
　　　　邮   编：510665          
　　　　电   话：020-32290789、8008304008
　　　　传   真：020-32068820   
　　　　网   址：http://www.daangene.com
　　　　【医疗器械生产企业许可证编号】粤食药监械生产许20040999号
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
附件2

人感染H7N9禽流感病毒核酸检测实验室生物安全保障基本要求
 


　　　　为加强人感染H7N9禽流感病毒核酸检测规范化管理，做好实验室生物安全管理工作，根据《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院第424号令，以下简称《管理条例》）、《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》（卫生部45号令，以下简称《管理规定》）等有关要求，制定本标准。供医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测时参考使用。
　　　　一、样本采集
　　　　（一）进行人感染H7N9禽流感病毒相关样本（以下简称“样本”）采集的操作人员必须经过生物安全培训合格，并具备相应的操作技能。
　　　　（二）样本采集过程中，操作人员要加强防护，应当穿戴防护服、眼罩、N95及以上水平的医用防护口罩、双层医用乳胶手套、帽子等个体防护装备。
　　　　（三）用于样本采集的主容器必须采用优质塑料材质，且大小适合、带螺旋盖、内有垫圈、无菌、耐冷冻的密闭容器。样本采集后，主容器盖必须盖严、拧紧，表面应当擦拭消毒。
　　　　（四）对诊疗过程中采集的各种临床样本，医疗机构应当加强生物安全管理，在进行动态风险沟通与评估基础上，采取样本登记造册、专库存放、专人负责以及必要的消毒处理等较严格的安全及安保管理措施。
　　　　（五）样本采集过程中产生的医疗废物要分类收集，应当在产生地点进行压力蒸汽灭菌或可靠的化学消毒，然后按感染性、损伤性等医疗废物收集处置。
　　　　二、样本包装和运输
　　　　（一）负责样本包装和运输的人员应当经过感染性物质包装、运输相关的生物安全培训，并取得相应资格。
　　　　（二）运输样本必须采取三层包装系统，由内到外分别为主容器、辅助容器和外包装。
　　　　病毒培养物按照A类感染性物质进行包装运输，其他感染性物质按照B类感染性物质进行包装运输。
　　　　容器或包装材料应当达到国际民航组织《危险物品航空安全运输技术细则》相应包装标准，符合防水、防破损、防外泄、耐高温、耐高压的要求。
　　　　（三）样本包装过程中，操作人员要根据所处环境条件参照本标准第一条第二款的相关要求采取加强防护。
　　　　（四）操作人员应当规范包装检测样本：
　　　　1.应当在实验室核心操作区内对装有样本的主容器外表面进行仔细检查并擦拭消毒，确保无泄漏、表面无残留物，并在外表面标明样本编号、种类、姓名及采样日期等信息。用足够的吸收材料包裹主容器，然后放入辅助容器，拧紧（A类）或封严（B类）辅助容器，必要时消毒辅助容器外表面。若多个主容器装入同一个辅助容器时，必须分别包裹，防止彼此接触，并在多个主容器外面衬以足够的吸收材料。
　　　　2.应在实验室清洁区采用适当的衬垫材料将辅助容器固定在贴有统一标识的外包装箱内，冰排或制冷器件应放在辅助容器和外包装之间。样本送检单、样本接收证明、准运证书、运送人员资质证明、发送和接收人员信息等相关文件材料应当放入防水的塑料袋中，置于外包装箱内上方。
　　　　（五）样本运输前应当联系接收机构实验室，告知样本送检目的、样本种类、数量和预计送达的时间等。
　　　　（六）负责运输样本的医疗卫生机构，应当按照《管理规定》有关要求，向省级卫生行政主管部门或中国疾病预防控制中心申请办理《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本准运证书》。在每次运输结束后，运输单位须将运输情况向省级卫生行政主管部门或中国疾病预防控制中心书面报告。
　　　　（七）包装合格的样本（三层包装系统）可通过航空或陆路运输。陆路运输应专车运输，并由2名或以上经培训合格的人员护送。运输途中样本主容器应始终保持直立，运输车辆内应携带具备清单及有效物品的应急处置箱（包），其中包括个体防护装备、感染性材料溢洒处置器具、皮肤及创口处置器具、医疗废物收集器具以及“生物危险”、“禁止通过”等警示标识。有关单位或者个人不得通过公共电（汽）车和城市铁路运输相关样本。
　　　　三、样本接收和包装开启
　　　　（一）负责样本接收与包装开启的操作人员应具备相应的操作技能，通过生物安全培训并取得相应资质。
　　　　（二）样本包装的开启应在生物安全二级及以上级别的实验室进行。样本送检单、准运证书、人员上岗证等相关文件材料的核查、登记，以及相关风险沟通/评估和开具样本接收证明等工作应在实验室清洁区内进行。
　　　　（三）包装开启过程中，操作者要根据所处环境条件参照本标准第一条第二款相关要求适时加强防护。
　　　　（四）实验室操作人员应规范接收检测样本、开启包装：
　　　　1.操作人员应当在生物安全柜内开启三层包装系统的第二层辅助容器，并仔细检查主容器表面有否破损、泄漏或残留物，发现异常情况应当立即执行实验室应急处置程序，同时登记并报告实验室负责人。
　　　　2.操作者应当在生物安全柜内消毒主容器表面，核对样本信息，进行下一步的实验室检测活动，或转移至指定的保存/保藏地点及位置。
　　　　（五）包装开启和样本核查结束后，应当在实验室清洁区完成交接手续，开具样本接收证明，交还外包装和辅助容器等。实验室操作人员应对所有异常情况进行详细记录，运输和接受样本的双方人员签字确认。
　　　　四、样本分装和检测
　　　　（一）负责样本分装、检测的操作人员应当具备人感染H7N9禽流感病毒相应的实验操作能力，经过生物安全培训，并取得培训合格资质。
　　　　（二）实验室用于人感染H7N9禽流感病毒检测的设备、设施必须运行良好，生物安全柜和压力蒸汽灭菌器应当年检合格。
　　　　（三）在生物安全二级实验室从事相关实验活动时，操作人员应当配戴眼罩、N95及以上水平的医学防护口罩，穿戴防护服、双层乳胶手套等个体防护装备。
　　　　（四）实验室生物安全等级要求：
　　　　1.疑似病例未经培养的临床样本应当在生物安全二级实验室的生物安全柜内分装、灭活和核酸提取。
　　　　2.人感染H7N9禽流感病毒的分离培养应当在生物安全三级实验室进行。
　　　　3.动物感染实验应当在动物生物安全三级实验室进行。
　　　　（五）开展人感染H7N9禽流感病毒相关实验活动时，应当有２名以上的操作人员共同进行。
　　　　（六）实验过程中产生的医疗废物要分类收集，应在产生地点进行消毒灭菌，然后按医疗废物收集处置。
　　　　五、样本保存和销毁
　　　　（一）各医疗机构应当将阳性样本按照要求集中专库保存。
　　　　（二）阳性样本、分离物的保存及销毁应当按照《管理条例》等法规和规范性文件有关要求执行。

　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
　　　　 
建设银行


中国人民建设银行关于印发《中国人民建设银行全国联行往来管理办法》的通知
建设银行


根据1998年1月9日《中国建设银行关于公布失效和废止的规章制度及规范性文件目录的通知》将本文废止。


为了进一步加强全国联行往来业务的管理，健全联行工作岗位的制约机制，确保联行划款安全，总行制定了《中国人民建设银行全国联行往来管理办法》（以下简称《办法》），现随文印发各行执行，并就有关问题说明如下：
一、《办法》是在《建设银行全国联行往来机构、行号、密押、凭证管理若干规定》和《中国人民建设银行会计核算办法》有关联行往来管理内容的基础上，结合近几年加强联行工作的要求而拟定的。《办法》综合了联行管理的各项规定，具有较强的系统性和全面性。
二、联行往来在划款资金过程中发挥着主渠道的作用，各行必须高度重视，加强领导。为此，《办法》规定了联行管理的任务和责任，提出“统一管理和分级负责”的原则，并要求各级联行要认真做好联行管理工作。
三、为了使业务量指标具有针对性，《办法》对开办全国联行往来业务量的规定由原来的会计凭证量改为联行业务量。联行业务量的确定原则是既有一定量的要求，又要适应工作需要。据此确定平均每日联行往来划款笔数10笔，即从1994年起新增全国联行机构的平均每日联行往
来划款笔数要达到10笔以上（含10笔）。
四、扩大全国联行范围。近年来经当地人民银行批准的一些行设立了分理处机构，有些承担了相当业务，需要开办全国联行。根据业务发展的实际情况，从1994年起取消对分理处开办全国联行条件的限制。凡符合本办法规定的条件的分理处，可申报全国联行。
五、为了严肃联行纪律，针对联行往来业务中出现的问题，便于妥善处理，《办法》增加了“联行纪律和责任”的内容，对联行查询顺序、对帐、错帐处理等主要责任作了原则规定。
各行在执行中如有问题，请及时报告总行财会部。


第一章 总 则
第一条 为了加强全国联行往来业务的管理，确保联行资金安全，根据会计制度的有关规定，特制定本办法。
第二条 联行往来管理的任务：遵守国家和本行有关法规，认真做好联行往来划款和机构、行号的管理及其印章、密押、凭证等的登记、使用、保管，加强安全保密，保证联行汇划资金渠道顺利畅通。
第三条 全国联行往来制度及印、押、证、行号由总行统一制定和核发。各联行要严格执行，不得自行修改或变更。
第四条 各管辖行负有对所辖各级联行直接管理的责任。各行要重视加强联行管理工作，采取有效措施，确保划款安全。

第二章 业务范围和内容
第五条 全国联行往来的业务范围
建设银行全国联行往来办理建设银行联行间代收、代付业务，除调拨资金、拆借资金以及按规定必须通过人民银行转汇外，系统内的结算业务和资金划拨均应通过联行往来划拨清算。
总行和各分行以及在联行机构名册中注明不对外办理结算业务的管辖行，只办理上、下级的资金往来划拨及主管部门与其他所属单位之间资金汇拨，不办理结算资金的转划业务。
同城有两个以上建设银行机构，且双方都参加同城票据交换的，相互间开户单位的结算资金，可通过票据交换清算。
第六条 全国联行往来划拨资金的内容
一、在两个建设银行机构开户的单位或个人之间结算业务的各项资金的划拨、结算；
二、向在异地联行所在地其他专业银行（指在同一城镇）开户的收付款单位划拨结算资金和其他资金（汇出行为单设机构地区即先直后横转划）；
三、其他专业银行开户的付款单位向异地建设银行开户的收款单位划拨结算资金和其他资金；
四、联行间往来资金的上缴和下拨；
五、联行间由于帐户移转经办行发生的帐户余额划转；
六、按规定可由联行扣收的款项。

第三章 全国联行机构
第七条 办理全国联行往来业务的机构，必须具备下列条件：
一、有健全的会计机构并有三名以上的会计人员（不包括出纳、储蓄人员），能够坚持做到联行印、押、证三人分管；
二、新设机构必须有人民银行批准的设立机构文件并已正式营业三个月，运转正常；
三、联行业务量平均每日达到10笔以上（包括通过上级行签开的跨省结算的银行汇票及一般汇款）。
第八条 申办全国联行的手续：由申请参加全国联行的行填制“申办全国联行往来机构报告表”（附式一）一式四份，由分管行长签章并盖行章，将三份报上级行。上级行接到申报表后，必须到申办行进行核实。符合条件的盖行公章，将两份报省分行审查签章后，一份随分行申报表转
报总行审批。
第九条 全国联行机构增设及变动
全国联行机构增加、撤销以及行号、行名、行址、电报挂号、邮政编码等需要变动，经各省、自治区、直辖市分行，计划单列市分行（以下简称分行）审查，分别汇编打印“增设全国联行机构申报表”（附式一），“全国联行机构变动表”（附式三），随文上报总行，经总行核准后，
以通报形式印发各分行，由分行翻印转发所属全国联行机构。
联行机构变动，由总行根据各分行上报的联行机构变动报告，经审定并汇编后每月通报一次。12月中旬起停止通报当年新增联行机构及变动内容。
第十条 全国联行机构的撤销
一、联行机构撤销时，拟撤销行应在一个月前将撤销的具体日期及撤销后联行业务接收行名称、行号地址、电报挂号、邮政编码上报管辖行，逐级报总行核准。待总行核准后，有关行方可办理撤销和接收手续。
各行申报撤销全国联行机构时，应在“联行机构变动表”内注明有关联行往、来帐的“并入或接收行”，以便有关联行办理联行业务的合并手续。
二、撤销行在向上级行申报撤销后至总行通报前，一般应停止签发联行划款报单，有专人负责清理帐务，直至全部联行往、来帐户核对处理完毕。但在此期间收到各地联行签发的联行划款报单，应照常处理，不得拒收。
自通报确定的撤销日起，全国各联行对撤销行不得再签发联行凭证。撤销行自撤销日起，收到有关联行在撤销日前填发的联行报单，应转接收行负责处理。
三、撤销行和接收行对联行的帐务处理，按《中国人民建设银行会计核算手续》“十五、机构变更的帐务处理”的规定办理。
第十一条 机构不撤销但撤销全国联行行号停办全国联行往来业务的，在接到总行撤销全国联行行号通报后，应立即停止向其他行签发联行划款报单。有关联行往来帐务双方应保留到年底，并按规定办理年终签证和清算。
第十二条 原办理结算资金转划业务的管辖行，因业务调整不再办理转划业务的，在接到总行通报后，应立即停止结算业务的联行划拨。有关联行帐务双方应保留到年底，并按规定办理年终签证和清算。

第四章 全国联行行号
第十三条 全国联行行号的组成与编排
全国联行行号由五位数码组成。全国联行行号由各分行在总行下达的控制号序列内编排，经总行通报后生效。
第十四条 全国联行行号的管理权限
总行：颁发各分行的区域控制行号范围；通报新启用行的全国联行行号和撤销、变更某行全国联行行号。
省分行：在总行颁发地区控制行号范围内，编排所属行的全国联行行号；办理全国联行行号的启用、撤销、变更申报；根据总行全国联行行号通报转发所属行。
第十五条 各分行对撤销行号，应严格掌握，慎重处理。不得在同一年度对同一行处的编排的行号，反复撤销、核发，已撤销行号的行处自撤销日起满一年方能重新申请办理全国联行业务。已撤销的行号，必须从撤销日起（以总行通报为准）满一年方能重新发给新设联行机构使用。

第五章 全国联行专用章
第十六条 全国联行专用章的颁发及启用
一、全国联行专用章由总行统一刻制，委托分行按规定核发所属联行机构使用（专用章与该行行号一致）。各分行如需增刻联行专用章，应向总行提出申请，由总行统一增刻。全国联行专用章的领入、颁发、使用、保管，应加强管理，建立登记保管制度。
二、新参加全国联行往来的行处，启用全国联行专用章的时间，必须与总行通报核准启用全国联行行号同步，不得提前启用。
第十七条 联行专用章的使用范围
一、签发联行往来邮寄划款报单；
二、信汇凭证第三联（特种转帐凭证）；
三、联行转划清单；
四、联行对帐签证单。
联行往来帐目的查询查复一律使用业务用公章。其他业务单证按规定加盖有关印章，不得盖联行专用章。
第十八条 联行专用章的保管和使用
一、联行专用章原则上应由会计负责人保管和使用。业务量大的行根据需要可由会计主管指定专人保管和使用。
联行专用章的保管和用印必须坚持一人，不得随意分人保管和用印。
二、加盖联行专用章时，必须使用红色印泥，签章清晰。联行专用章要严加保管，不得任意置放。各行应配置带锁的铁皮盒存放，临时离岗，铁皮盒要上锁。做到“人在岗章在位，人离岗章入盒上锁”。营业终了把锁好的印章盒放入保险柜保管。工作调动或暂离工作岗位时，必须办理
交接手续，并在“会计专用印章保管使用登记簿”的“交接记录”栏由交换人员和会计主管人员注明交换日期并签章。
三、撤销行号的行处的联行专用章，应即交回分行并办理移交手续。分行对收回的联行专用章应即登记封存保管，不得切角、损坏、销毁、严防丢失。俟恢复使用这一行号时，再将联行专用章发给新颁行号的行处继续使用。
四、联行专用章由于磨损或其他原因不能继续使用的，应交分行保管。由分行申报更换新的行号和发给新的联行专用章。
五、由于工作需要，总行通知启用新的联行专用印章后，停止使用的联行专用章一律逐级上交分行集中封存保管，并在停止使用后三个月内进行切角或熔化销毁，编制销毁明细清册上报总行备案。

第六章 全国联行密押
第十九条 联行密押的颁发
全国联行密押（含密押编制办法、特约数码，下同）由总行统一制定，委托分行按规定核发所属联行机构，全国联行密押只限于总行核准颁发全国联行行号的行处在办理联行业务时使用。
全国联行密押由总行决定启用或废止。
第二十条 编押范围：联行往来划收款报单（包括邮划或电划）；总行今后规定的其他需要编押的结算凭证。
签发联行往来划付款报单不编密押。
第二十一条 联行密押的保管和使用
一、联行密押按全国金融系统保密规定属于绝密级事项。各级行处必须按“绝密”级管理要求，严格管理。各级行领导必须加强安全保密措施，指定政治上可靠，工作责任心强的会计人员使用。
二、全国联行密押的保管及使用实行个人负责制。
1．基层行由经办联行人员自编、自核，发生丢失和泄密由其负全责。联行业务较多的行，可设专职编押人员并负责保管和使用。
编押人员因故未上班的由会计主管人员代为编核押。
2．管辖行保存的尚未使用的联行密押由会计主管保管。
3．联行划款中密押发生差错，应及时发出（最迟次日内）查询与查复，在查询中，不得涉及密押的组成以及密押编制方法等内容。
4．各级管辖行在发送联行密押时，可采取专人领取或机要寄发的方式。派专人领取的要双人领取（会计、保卫部门各一人），用牢固的封套密封并在封套封口处贴棉纸后加盖公章。通过机要部门寄发的，必须按寄发“绝密”件手续办理。
使用密押人员要按规定要求严密保管，密押用后，必须立即装入保险箱（柜）保管。
5．联行密押在总行通知停止使用后填列销毁清单，并逐级上交各分行集中粉碎销毁。销毁时财会、管押、保卫人员三人在场，共同负责销毁后，将销毁清单报总行备案。
6．经管密押人员调动工作或暂离工作时，要将经管的密押填制移交清单（一式三份，移交人或接管人各一份，归档一份），由接管人逐项点收，并将密押使用方法和注意事项交待清楚。移交工作由主管行长或会计主管监交。
移交人员要继续保密，不得对外泄露密押内容和编押方法。
7．各行密押要指定专人按规定的要求妥善保管和使用，不得扩大知密范围，不得抄录副本，不准在制度汇编、刊物和教材上登载。
8．签发邮寄和电报联行往来划收款报单时，必须认真按规定编列密押，保证准确无误。如发生填写错误，不得更改，应重新填制一份联行划款报单，错误报单按本办法第二十二条“十”规定办理。收受方必须认真核对，密押不符应及时查询（最迟次日内），在查复更正后才能转帐。


第七章 全国联行往来报单
第二十二条 联行往来报单的保管和使用
一、办理全国联行往来一律使用总行规定格式的联行往来报单，包括“联行往来划收款报单”和“联行往来划付款报单”、“电报划收款补充报单”和“联行往来转划款清单”。
1．“联行往来划收款报单”，是专用于向联行转划代收款的凭证。包括：划拨各种结算业务款项，上下级行间有关款项的清算等。使用时分邮划和电划两种方式。
2．“联行往来划付款报单”，是专用于向联行划转代付款的凭证。包括：划转拨款支出、贷款帐户余额、上下级行间有关款项的清算，解付汇票以及按规定可代扣的其他款项。使用时只限邮划方式，不得电划。
3．联行往来划收款采用电划时，要按照总行统一规定的电文格式填写（附式四），不得简化或变更，以免发生差错。
“电报划收款补充报单”，由收受行根据联行往来的划收款电报填制的联行划收款记帐凭证。
4．“联行往来转划款清单”，是办理“先直后横”转划款项，便于事后查考的凭据，转划款清单的金额和内容必须与联行往来报单及所附结算凭证相符。
二、全国联行往来报单格式由总行统一制订。手工填写的报单由各省分行负责印制、分发。采用电子计算机打印的，按“会计核算应用电子计算机管理规程”的规定打印。
三、使用电报方式发送联行往来报单，其电文必须按总行规定的格式、内容拍发、不得加入其他内容或变更格式。
四、使用电报方式发送联行往来报单或查询，其电报种类必须使用“Ｋ”类电报。
收受行收到有与总行规定的格式、内容和电报种类不符的不得入帐。
五、联行往来报单（含压感纸套印报单）属重要空白凭证，必须按“重要单证管理办法”进行管理，指定专人严密保管，列表外科目“重要空白凭证”核算，建立健全领发保管制度，做到有帐有实、帐实相符。
六、严格联行报单的入库手续，印制的空白联行报单要办理入库手续，根据委托印制任务单验收，验收时应清点数量、起迄号码和检验质量。验收合格的，填制“重要单证入库单”，并按规定登记“重要单证登记簿”。
七、全国联行往来报单的分发、领用。分发空白联行往来报单时，由分发行填制调拨单交领用行，领用行据以填制“重要单证领用单”一式二联，持向分发行办理领取手续。分发行经与调拨单核实，在“重要单证领用单”上盖章后，一联为出库记帐凭证，一联交领用行据以填制“重要
单证入库单”，登记“重要单证登记簿”，领用单作为入库单凭证的附件。
八、联行专柜（组）领用空白联行报单时，应根据业务量多少和专柜（组）保管条件等有计划地领用，不宜领存过多。领用时，填制“重要单证领用单”一式二联，经签章后交管库员。管库员审查无误后，配发空白联行往来报单，经领用人清点后，在一联领用单上签字，作为出库记帐
凭证，一联退领用人保管。对于本柜（组）内部，每个经办人所领用的空白联行报单亦要做到手续清楚，责任分明。
九、每日营业终了，应根据联行往来报单存根联分别统计已使用凭证的份数，登记“重要单证登记簿”并结合数量和余额，与实存联行往来报单核对相符，然后将结存报单装箱加锁入库（柜）保管，不必办理退库手续。
十、遇有填错作废的联行往来报单（包括微机打印的联行报单）应加盖“作废”戳记，按报单号码及时登记“作废重要单证登记簿”，并将作废的联行往来报单装订在当日联行凭证的后面，便于管理和查阅。
十一、不得用联行往来报单作为教学和练习之用。
十二、严禁在联行往来报单上预先盖好联行专用章。
十三、电子计算机打印的联行报单除按上述要求外，应由专职会计人员每天坚持登记当日打印联行报单起止号码并专夹保管，其规格、栏目内容还必须符合统一规定的格式要求，并冠以省别和报单流水号。密押不得输入电子计算机编制（总行另有规定者除外）。
第二十三条 联行往来报单的填制和签发
一、分清划款种类，分别填制划款凭证
1．联行间划收款或划付款，要分别填制“联行往来划收款报单”和“联行往来划付款报单”，不得按收、付款项轧差后的差额划款。
2．划款要严格区分系统内划款及异地跨系统的“先直后横”转划款。
凡收付款单位在建设银行开户的代收非大额汇款（按人民银行规定，下同）和代付款项，应直接向收付款单位开户的建设银行签发“联行往来划收款报单”或“联行往来划付款报单”划款。
汇出行所在地是单设机构的采取“先直后横”转划时，汇出行向收款单位所在地的建设银行签发“联行往来划收款报单”转划，邮划必须附有联行往来转划款清单。
3．划往同一收受行同时有系统内的划款及系统外转划款的，必须分别填制“联行往来划收款报单”或“联行往来划付款报单”划款，不得混在一份报单划款，以免造成查考的困难。
4．电报划款应一笔一划，即按每笔结算凭证填制划款报单拍发电报，严禁并笔拍发电报。
5．年度内往帐行签发第一笔私人汇款联行往来报单，不得采用电划方式。
二、联行往来报单金额字迹必须清晰、准确，并与附件核对相符。
三、填制联行往来报单及电报必须做到：报单种类使用正确；项目填写完整；单位名称及款项内容清楚；金额、余额、密押准确；印章字迹清晰，附件齐全。邮划报单的“收受行”及“签发行”栏必须填写行名全称和行号，联行往来报单必须经过复核。
四、电报划款电文中的日期、报单号码、帐号、次数、金额、余额、密押、行号等均用阿拉伯数码填写并加括号，金额及余额数码分两组拍发，即元以上为一组，角分位为一组。例如：43221．05元填写为（43221）（05），不必写金额单位，对只有元而无角分的，也应
加角分位，如43221．00元，填写为（43221）（00）。
五、联行往来报单的编号方法，应分年度按每个收受行编列顺序号，即在年度中签发行签发联行往来报单时，应按签给同一收受行联行往来报单的先后顺序（不分划收或划付），在联行往来报单上编列顺序号，不得跳号。
六、联行往来报单“我行往帐户借贷方余额”栏，由签发行根据本行“往帐户”的余额（包括本笔帐目在内）填列，借方余额的将“贷”字划去，贷方余额的将“借”字划去。
七、联行往来报单必须使用银行专用挂号信封，进行登记后寄发。收件人地址必须详细写明省、市、县、区、街名称、邮政编码及门牌号，收件人名称应写收受行全称并加会计处（科）字样，不得简称缩写，挂号信封封面上注明联行往来报单的份数。
收到的挂号信件，必须清点份数签收，拆封时必须核对编号。每天将空信封进行复查，并要保存半年后处理，以便清查。
八、拍发联行电报，必须按规定的电文格式填写划款“Ｋ”类电报，登记后专人送邮局按规定手续拍发。
九、收到联行往来报单应在当日处理，业务量较大的集中转划行最迟在收到的次日处理完毕。如联行往来报单有问题不能转帐，也应在此期限内向有关行查询。
对有问题的联行往来报单，收受行不得将原联行往来报单退回，应以帐务联系书或总行规定的电报格式向对方查询，接到查复后，区别情况处理（处理手续详见《中国人民建设银行会计核算手续》）。

第八章 纪律与责任
第二十四条 会计年度内签发的联行往来报单，均为当年联行往来报单记当年联行帐。年度过后不再签发上年度的联行往来报单。
第二十五条 各级行处要认真履行职责，坚持逐笔复核联行往来报单各要素及电报类别，未经复核的联行往来报单严禁寄发和解付。如果因联行划款发生差错而影响单位用款或造成经济损失的，由发生差错的一方负责；凡是属签发联行往来报单的错误或对查询不及时答复，由签发行负
责，收受行发现联行往来报单有误不及时查询负有连带责任；凡是签发的联行往来报单无误，而属收受行处理的错误由收受行负责。
第二十六条 对帐过程中一时难于查清的帐目，由往帐行向来帐行抄寄（或复印）副本帐页，来帐行收到副本帐页后，逐笔勾对，查明不符帐项后，及时通知对方行错帐原因，共同协商调整帐项：
一、已查清余额不符确属联行往来报单未达的，由收受行出具公函，证明确未收到，签发行收到公函后，向邮电局查询的同时给收受行补寄联行往来报单，补寄的联行往来报单一律采取邮寄方式，并在摘要栏内说明“补寄×年×月×日×号”联行往来报单，如补寄联行往来报单已记帐
，又收到原联行往来报单，应将原联行往来报单作附件附其后。
二、属重划款项，如已转划到其他专业银行或单位已经支用，收受行要主动追回，一时追不回的，将重划联行款转入“其他应收款”，先对清联行帐务，待追回款项时再予冲销。
第二十七条 联行印章、密押、联行往来报单必须三人分管，并建立交接登记制度。各级行处领导要定期对管理情况进行检查。
印、押、空白联行往来报单发生泄密、丢失、被盗或不法分子作案，各行处要及时采取有效措施，进行查处，除组织人员立即查找和采取防范措施外，还应按《中国人民建设银行实施〈保密法〉、〈保密法实施办法〉的细则》（以下简称《细则》）的有关规定在三日内逐级上报总行。
对责任性事故，各行要根据《细则》的有关规定，按管理权限进行处理。
第二十八条 凡因不认真执行“全国联行往来管理办法”等各项规章制度而造成重大资金损失的，要由责任行、处负责并追究有关领导及当事人的责任。
第二十九条 开办全国联行的各级行处必须按总行与邮电部电信总局联合通知规定的要求，到当地邮电局办理电报挂号手续，交纳费用。由于未办电报挂号手续和按期交费，影响电报投递而造成经济损失的，由责任行赔偿。

第九章 附 则
第三十条 全国联行往来会计年度为每年1月1日起至12月31日止。
第三十一条 开办省辖联行往来的各省、自治区分行，对省辖联行往来的管理比照“全国联行往来管理办法”制订具体规定，帐务处理按《中国人民建设银行会计核算手续》办理。
第三十二条 总行确定使用“电子密押器”编核押后，有关密押器的保管和使用总行另行规定。
第三十三条 本办法自1994年1月1日起施行，过去有关规定与本办法抵触的以本办法为准。
附式略。



1993年11月9日